离心柱式外泌体分离试剂盒

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（一）使用方法（外泌体分离使用方法）

1. 样品预处理

1) 去除细胞。4℃，300 g，离心5 min，转移上清到新的离心管；

注意：对无细胞的样品，可以跳过此步骤。

2) 去除细胞及细胞碎片。4℃，2000 g，离心10 min，转移上清到新的离心管；

3) 去除大体积颗粒。步骤 2）得到的上清，4℃，14000 g，离心30 min，转移上清到新的离心管。

2. Spin Column 01离心柱预处理

1) 根据待分离外泌体样本数量，从试剂盒中取出相同数量的Spin Column 01和Collection Tubes (2 mL)，打开Spin Column 01下端堵头，将其放入Collection Tubes (2 mL)中，用移液器吸弃Spin Column 01上层的保护液体；

2) 向Spin Column 01中加入500 μL Solution A，300 g，离心1 min，弃去Collection Tubes中废液；

3) 重复步骤2）1次；

4) 将Spin Column 01放入新的2 mL离心管中，用于下一步外泌体的分离。

注意：如果样本体积不超过0.2 mL，也可以使用1.5mL离心管。

3. 分离外泌体

1) 将预处理后的样本（50-500 μL）加入到上述预处理的Spin Column 01中，4℃，300g，离心1 min；

a. 如果样品体积超过0.5 mL，建议试用50 kDa超滤管浓缩样品至0.5 mL，注意浓缩体积不超过20倍。

b. 对高粘度样本，如血浆、血清、胸腹水等样本，可用等体积去离子水稀释再加入到Spin Column 01中。

c. 对杂质较多的样本，如血浆、血清、胸腹水、牛奶等样本，建议用PBS稀释10倍，经过50 kDa超滤管浓缩 10倍；然后加入剩余液体10倍体积的PBS，超滤浓缩10倍后再用Spin Column 01分离外泌体。d. 离心法分离时，控制离心力在300-500 g（若样本粘度大，适当增加离心力），才能实现良好的外泌体分离效果。

2) 取下Spin Column 01，离心管中液体即为分离的外泌体，取一部分进行检测，其余溶液置于-80℃保存。

注意：根据外泌体溶液性质对后续实验的影响，选择是否使用超滤管（MWCO：10 kDa）置换其他溶液。

（二）使用方法（游离染料去除）

1. Spin Column 01离心柱预处理

1) 根据染料去除样本数量，从试剂盒中取出相同数量的Spin Column 01和Collection Tubes (2 mL)，打开Spin Column 01下端堵头，将其放入Collection Tubes (2 mL)中，用移液器吸弃Spin Column 01上层的保护液体；

2) 向Spin Column 01中加入500 μL Solution A，300 g，离心1 min，弃去Collection Tubes中废液；

3) 重复步骤2）1次；

4) 将Spin Column 01放入新的1.5 mL离心管中，用于下一步外泌体的分离。

2. 去除游离染料

1） 将荧光染料标记的外泌体样本（50-200 μL）加入到上述预处理的Spin Column 01中，4℃，300 g，离心1 min；

2） 取下Spin Column 01，离心管中液体即为分离的外泌体，可进行后续实验。