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细胞学堂 | Advanced培养基：更优质的细胞培养选择
来源：Pricella 浏览量： 发布时间：2024-10-25 15:00:00
在细胞培养过程中，培养基的重要性不言而喻。它不仅是细胞生长和增殖的物质基础，还直接影响着细胞的生长状态、表型、功能以及实验的准确性和可重复性。培养细胞时，通常会添加10%的血清，然而，这种做法伴随着成本高、批次间差异大以及潜在的污染风险等问题。
为了解决这些难题，普诺赛通过优化经典的基础培养基配方，成功开发出Advanced系列培养基，包括Advanced RPMI-1640、Advanced DMEM、Advanced DMEM/F12及Advanced MEM四款产品。Advanced培养基能够有效减少血清使用量，提供更稳定的培养环境。
本文将详细介绍Advanced培养基的优势、细胞适应和在使用中的注意事项，帮助您更好地了解和使用这一类培养基。
Advanced培养基优势
减少血清依赖，降低实验变异性
血清在传统培养基中的主要作用是为细胞提供必要的营养和生长因子，但由于血清成分复杂且存在批次间差异，可能导致实验结果的波动性。Advanced培养基通过减少血清的使用量，有效降低了这些变异性，提高了实验的可重复性和一致性。
可直接替代基础培养基
用Advanced培养基替换基础培养基，仅需添加L-丙氨酰-L-谷氨酰胺或L-谷氨酰胺以及减少添加量血清，即可制备完全培养基。对于大多数细胞系，无需驯化或经间接适应过程，即可将培养基中的血清用量减少至少50%。
减少血清使用量而不影响细胞生长性能
Advanced培养基成分经过优化后，能够为细胞提供更合适的生长环境，减少不必要的成分干扰。与经典完全培养基（含10%血清）相比，多种细胞在Advanced培养基中减血清（含2-5%血清，甚至更低）培养，表现出相同甚至更优的增殖效果，且细胞形态不发生显著变化。
细胞适应
更换培养基时进行细胞适应测试是为了减少细胞应激反应，使其逐渐适应新的环境，避免突然变化培养条件导致细胞生长变慢甚至死亡。
对于大多数细胞系，在使用Advanced培养基时无需适应，可直接降低50%血清用量而不影响细胞状态（参考直接适应的方法）。
如果观察到细胞生长速度变慢、形态改变、次级代谢物产生水平不理想或需要进一步降低血清浓度时，则需采取一定的方法使之逐渐适应低血清环境（参考间接适应的方法）。
直接适应
细胞能够持续增长维持3代以上，即认为已经适应新培养基。
间接适应
按照Advanced完培:原配方完培=25:75的比例混合新旧培养基，用于培养细胞；
监测细胞生长和传代培养，逐步增加新培养基的比例，直至全部更换为Advanced完培，参考25:75 → 50:50 → 75:25 → 90:10 → 100:0的顺序（每个步骤可能需要多次重复，直至细胞完全适应新的减血清培养基）；
在100%的Advanced完全培养基中细胞持续增长3代以上，即认为已适应新培养基。
无需适应
经过验证，使用普诺赛®Advanced系列培养基时，以下细胞系无需间接适应步骤，即可直接培养：
使用Advanced RPMI-1640：
Vero、Raji、Daudi、Jurkat, Clone E6-1、THP-1、4T1、CT26.WT、PC-12 (High differentiation)、22RV1、BxPC-3、B16-F10
使用Advanced DMEM：
Vero、COS-7、A549、3T3-L1、HuH-7、MDA-MB-231、SW620、NRK-52E、A-673、C2C12、RH-35、Ishikawa、CHL
使用Advanced DMEM/F12：
Vero、LX-2、KGN、C8-D1A、Hela、NIH-3T3、KLE、ARPE-19、4T1、NIH-3T3、JHH-7、NCI-H2009
使用Advanced MEM：
Vero、HK-2、Hep G2、Caco-2、NCTC Clone 929、Hela、U-87 MG、HMC3、PK-15
Advanced培养基使用注意事项
01
并非所有的细胞都适合使用Advanced培养基减血清培养，尝试减血清培养前，务必先用少量细胞测试使用效果，确保减血清对细胞状态无影响后再进行大量替换。
02
Advanced培养基中特别添加了乙醇胺、谷胱甘肽等成分，以减少血清的使用量。通常情况下，细胞可减少原完全培养基至少一半的血清用量，如想进一步减少血清用量（如低至0.5-2%），需针对每种细胞系进行更低水平血清培养适应，以实现更大幅度的血清减少。
03
使用Advanced培养基虽能实现血清用量的减少，但对于血清品质的要求并未降低，建议使用高品质的胎牛血清进行细胞培养。
04
在细胞进行Advanced培养基减血清培养适应前，请确保细胞状态良好。如更换培养基前存在细胞状态差甚至有不易察觉污染的情况（如支原体或黑胶虫污染），则细胞适应Advanced培养基减血清培养的成功率将大幅降低。
（点击图片了解更多产品信息）
Advanced RPMI-1640
PM153110
Advanced DMEM/F12
PM153312
Advanced DMEM
PM153210
Advanced MEM
PM153410
以上是关于Advanced培养基的优势、细胞适应和使用中注意事项的介绍，更多细胞培养干货，请持续关注细胞学堂专栏~
