贴壁细胞传代培养

本视频为普诺赛贴壁细胞传代培养操作指南，对每一步操作都做了演示，以便实验者更好地理解贴壁细胞传代实验过程。

贴壁细胞传代实验准备：

将15 mL离心管、T25细胞培养瓶、PBS缓冲液、移液管、电动移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30 min消毒灭菌；
细胞完全培养基、0.25%胰酶-0.02%EDTA从4℃冰箱中取出后，复温至室温，备用。

贴壁细胞传代实验步骤：
1. 将准备好的培养基等物品用酒精消毒后放入安全柜中；
2. 从培养箱中取出待处理的细胞，在显微镜下观察细胞状态；
3. 用酒精消毒培养瓶，放入安全柜中；
4. 轻轻吸去细胞上清；
5. 加入2-3 mL PBS缓冲液润洗一次，吸去上清；

6. 加入1 mL 0.25%胰酶-0.02%EDTA，轻轻晃匀、覆盖所有细胞后，置于37℃培养箱静置消化；
7. 消化1-2 min左右，在显微镜下观察细胞消化情况，每个细胞消化时间有所不同，具体以细胞消化状态为准；     

8. 消化完全后，加3 mL完全培养基终止，1200 rpm，3 min离心，去上清；
9. 加入新鲜完全培养基重悬，按比例将细胞悬液分装至培养瓶中；

10. 在显微镜下观察传代后的细胞密度及状态；                 
11. 将培养瓶放入培养箱中培养。

注意事项：
1）培养过程中需维持细胞处于对数生长期，80%左右即可传代，传代比例请参照说明书建议；
2）消化时间不宜过长，大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化，难消化的细胞可分次消化，每次时间不超过5 min；
3）培养过程中需要定期换液，一般细胞建议2-3天换液一次。