直播答疑 | 常见细胞增殖检测方法

MTT贴壁细胞要预培养24小时以上吗？

MTT检测中，贴壁细胞需要根据细胞的生长速度来看细胞接种时间，细胞在对数期的时候可以进行干预刺激。

怎么确定EdU的孵育时间？

EdU孵育时间由细胞周期决定，一般是细胞周期的1/10-1/5，大部分细胞系可采用孵育2小时的方式，也可以参考有些EdU增殖检测数据库中推荐的细胞孵育时间。

请问不更换培养基加CCK-8，有没有影响？

可以不更换培养基加CCK-8，不过加之前最好要观察一下细胞的状态以及密度。

原代培养干细胞的时候，怎么判断细胞状态是在增殖还是诱导成其他细胞了呢？

原代细胞培养中，细胞状态的判断，需要结合细胞的形态、细胞的生长速度、细胞纯度等来判断。判断增殖最简单的方法，是看细胞的数量是否增加，至于细胞是否诱导成其他细胞，这个需要通过鉴定，来判断是否变成其他细胞，或者变成其他细胞的比例。

毒性或者抑制OD不都是下降的吗？毒性下降的更明显吗？

具体要看检测的方法。如果是MTT或者CCK-8等通过检测活细胞来反映毒性的，OD值与对照组比，值下降，说明细胞活力越低，毒性越大或者抑制增殖；如果是检测死细胞来反映毒性的，OD值越低，说明死细胞越少，毒性越小。

怎么检测药物对细胞的毒性作用还是过表达了基因的抑制作用？

EdU孵育时间由细胞周期决定，一般是细胞周期的1/10-1/5，大部分细胞系可采用孵育2小时的方式，也可以参考有些EdU增殖检测数据库中推荐的细胞孵育时间。

OD值一般范围多少比较好？

一般是在0.1-2.0之间，最好在1.0附近。

克隆培养期间需要换液吗?

可以进行1-2次换液，注意换液前预温培养基，沿壁加液。

3厘米的培养皿可以放多少培养基啊？

建议加3毫升左右。

过期一年的1640培养基还能用吗？

建议不要使用，如果是基础培养基，觉得扔掉比较可惜，可以当作PBS来使用，但要注意保持无菌。

室温放置了三天的培养基还能用吗？

培养基一般是4℃存放，放室温3天，需要观察下培养基颜色，有无浑浊、沉淀和絮状物，如果是培养液中添加了一些特殊因子，需要考虑添加因子的稳定性，如果没有以上异常情况，可以使用。

胰蛋白酶冷消化组织后，都是黏液组织，离心也没办法，怎么把黏液组织转移到新的管子里再进行二次消化呢？

如果是胰酶消化的时候出现粘液组织或者组织呈果冻状，可能是组织中细胞损伤大，释放的DNA胶体包裹细胞碎片。建议观察是不是消化液的体积较少，可以用低浓度的胰酶或者消化作用更温和的胶原酶消化，同时也可以加Dnase I。

人成纤维细胞很难消化，每次都不能完全消化下来，有什么办法可以解决？

细胞难消化，与消化用的胰酶浓度、胰酶温度、胰酶是否充分浸润、胰酶是否含EDTA、培养瓶是否包被等因素有关，建议从以上方面进行调整。